猕猴桃雄性基因RAPD标记的研究
姚春潮
【摘要】：本研究以美味猕猴桃20个品种(株系)、中华猕猴桃15个品种(株系)及美味猕猴桃海瓦德×秦雄201人工控制杂交群体14个单株共计49份材料为试材,首先以亲本海瓦德和秦雄201的DNA为模板,对随机引物进行筛选,然后以F_1代6个植株的DNA等量混合的雌性DNA样与雄性DNA样为模板,对引物进一步筛选,最后用杂交组合F_1代个体DNA为模板,获得了与猕猴桃雄性基因连锁的RAPD标记S1032_(850)和S79_(750),并对所得标记的有效性在中华猕猴桃和美味猕猴桃上进行了验证。同时对获得的与猕猴桃雄性基因连锁的RAPD标记S1032_(850)进行了测序及序列相似性分析。取得的主要结果如下: 1.通过对300个随机引物的筛选和研究,得到了与猕猴桃雄性基因连锁的RAPD标记S1032_(850)和S79_(750)。在中华猕猴桃、美味猕猴桃雌雄个体上进一步验证发现:标记S1032_(850)存在于研究所用的22株雄株中,在27株雌性个体中只有4株存在标记片段S1032_(850);标记S79_(750)在22株雄株中有19株存在(在F_1代6株雄株有5株存在),在27株雌性个体中有13株存在标记片段S79_(750)(在F_1代6株雌株有1株存在)。表明猕猴桃雄性基因连锁的标记S1032_(850)与实际符合率高于标记S79_(750)。 2.从美味猕猴桃“秦雄201”亲本和中华猕猴桃“江西78-1”中分别回收了特异标记S1032_(850)的DNA片段,对它们进行了克隆、测序,获得了S1032_(850)标记的核苷酸序列,其由867 bp的特定碱基序列组成。将来自于中华猕猴桃雄性标记S1032_(850)的特定碱基序列片段登陆Genbank,其登陆号为AY336259。为进一步将RAPD标记转化为SCAR标记和利用特定碱基序列及基因连锁图谱克隆雄性基因奠定基础。 3.利用BLAST工具对美味猕猴桃和中华猕猴桃特异标记S1032_(850)的DNA片段碱基序列进行了相似性分析,两序列的相似性达97%。在CBI库中,利用BLAST工具对美味猕猴桃特异标记S1032_(850)的DNA序列相似性分析发现,该序列与其它生物体DNA序列同源性较小,为猕猴桃基因组所特有。
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