不同猕猴桃品种溃疡病抗性鉴定及抗性相关酶研究
易盼盼
【摘要】：当前，猕猴桃已在中国经济果树中占有一席之地，陕西省是猕猴桃种植面积最大的省份，其猕猴桃产业发展在中国猕猴桃产业发展中的作用至关重要。近年来，陕西省猕猴桃主栽区溃疡病发生严重，对猕猴桃产业的发展产生了巨大的影响。 本研究首先分离纯化了陕西省秦岭北麓猕猴桃主栽区的溃疡病病原，并对该病原进行分子鉴定及致病力鉴定。其次对18份猕猴桃材料进行田间调查，采用人工接种法将病原菌接种到18份猕猴桃离体枝条及盆栽苗枝条上，观察统计接种后5、10、15、20d18份材料的感病率，并对三种鉴定方法的结果进行了比较。同时在盆栽毛花、金魁、华优、金阳、红阳猕猴桃接种0、5、10、15、20d后共5个时间段进行采样，测定不同品种枝条苯丙氨酸解氨酶（PAL）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）的活性变化。最后，以陕西省西安市猕猴桃试验站抗病雄株（SX45872）和感病雌株（西选二号）以及杂交授粉的198株F1代实生苗为对象，利用SSR分子标记技术，并结合集群分类分析法进行了猕猴桃抗溃疡病基因分子标记研究，主要研究结果如下： 1.分离纯化出陕西秦岭北麓猕猴桃主栽区的溃疡病病原菌，经过细菌通用引物和特异性引物扩增以及其16S rDNA序列分析，结果表明：该病原为丁香假单胞菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.actindiae)，其16S rDNA序列与已报道的猕猴桃病原一致。通过烟草叶片、猕猴桃枝条及叶片接种试验，结果表明该病原具有侵染烟草和猕猴桃的能力。 2.通过对18份猕猴桃材料的田间调查、离体枝条接种以及盆栽苗活体接种的鉴定，结果表明：18份猕猴桃材料离体枝条以及盆栽苗接种结果与田间调查结果的基本一致，且都达到极显著相关水平，相关系数分别为0.968和0.975。因此，认为离体枝条接种和盆栽苗接种可作为猕猴桃溃疡病的鉴定方法，但与盆栽苗接种相比，离体枝条接种鉴定更简单、易操作。 3.盆栽苗接种5、10、15、20d后，毛花、华优、金魁、金阳和红阳枝条内PAL、SOD、POD及PPO活性与活性与接种0d时相比，均显著提高（P0.05），但各品种酶活性峰值出现时间不同；毛花、金魁和华优接种后枝条中PAL、SOD、POD及PPO的活性迅速持续升高，接种10d后达到高峰，而金阳和红阳酶活性增加较缓慢，接种后15d才出现峰值，并低于毛花、金魁及华优的峰值。出现峰值之后，活性不再升高呈缓慢下降趋势。从接种溃疡菌后CAT酶活性的变化趋势来看，毛花、华优接种后10d后，出现峰值，金魁接种5d后，其酶活性达到峰值，且这3种猕猴桃材料的峰值均显著高于接种0d；但金阳和红阳接种后CAT活性与接种0d时差异不显著。试验证明：PAL、CAT、POD、CAT及PPO的活性与猕猴桃品种溃疡病抗性相关。 4.通过对51对SSR引物的筛选，获得了与抗溃疡病基因连锁的分子标记UDK97-428116，并采用人工离体接种将获得的标记在40个猕猴桃种质资源中进行了验证，40份材料中仅有一份材料的鉴定结果与分子标记不同，其他39份材料均与分子标记结果一致，表明了该标记的可靠性，从而认为SSR标记UDK97-428116能够用于猕猴桃材料溃疡病抗性鉴定和分子标记辅助育种。
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